Проблеми с уплътняване и замърсяване в многообийните плочи на клетъчната култура

Зареждане и боравене с многояселни клетъчни културни плочи:

Плаката за клетъчна култура също следва принципа на строгия асепсис при извършване на клетъчни операции. Всички операции трябва да бъдат стандартизирани и научни и няма да причинят допълнително въздействие върху растежа на клетките. Най -често срещаният проблем е как да се гарантира равномерността на клетките след добавяне на пробата и да се сведе до минимум въздействието на промяната на средата върху състоянието на растеж на клетките.

питам:
Капаците на 96 и 24-ямкови културни плочи или петри ястия са много разхлабени, което е удобно за вентилация, но ще се промъкнат ли и бактерии, плесен и други замърсители?

отговор:
Капакът е много разхлабен, който принадлежи на полуотворената култура и целта на това е да се вентилира (всъщност е да се направи CO2 извън културното ястие напълно обменя с културното ястие и да поддържа pH стойността на културата среден).
Всичко има предимства и недостатъци, което разбира се увеличава възможността за замърсяване. В допълнение, това причинява течността в ястието да се изпари, което е забележително за прецизно дозиране на лекарства. Следователно са необходими следните две мерки: a. Въздухът в инкубатора трябва да бъде чист (редовна ултравиолетова светлина, почистване на алкохол и инкубаторът трябва да се отвори и затвори възможно най -малко) b. Влажността в инкубатора винаги трябва да се държи на 100% (мивката със стерилна дестилирана вода, поставена в инкубатора).
Точно като чиния на Петри, тя е и контейнер с капак с главата надолу и няма да бъде замърсен. Главно поради отрицателното налягане на въздушния поток, генериран от ръба на "L" на капака, има микроорганизми, прикрепени към праха, а прахът, носено от въздушния поток, не може да премине през ръба на капака, който генерира отрицателно налягане. Ефектът на вентилацията е само чрез дифузия на въздуха и няма да се генерира въздушен поток, така че той само ще диша и няма да проникне в бактерии.

питам:
Използвайки 24-ямкова плоча, в някои от кладенците има операции (в ултра-чистата пейка) и има клетки, които да се култивират в други кладенци. Притеснявам се, че това ще доведе до замърсяване. Не знам на какво да обърна внимание?

отговор:
Ако операцията е стандартизирана в ултра-чистата пейка, трябва да е наред. Мисля, че можете да използвате пълноценно покритието на културната плоча, да се опитате да изложите само дупките, които да се задействат, и да покриете останалите дупки с капаци.
Помислете за цялостно преди употреба и използвайте пълноценно всички дупки; Ако трябва само да използвате няколко дупки, можете да използвате само едната страна и да покриете останалото с капак. Първо съм свикнал да използвам десния отвор (удобно е да добавя проби в дясната ръка).

Когато работите, използвайте няколко стъклени слайда, за да повдигнете едната страна на дъската, не отваряйте напълно капака, като цяло няма проблем.
Неравномерно разпределение и решения на клетките

питам:
Клетките се инокулират на културната плоча и клетките винаги се събират в периферната част, как да се справят с нея?

отговор:
Мога ли да попитам как се смесват клетките ви? Това ли е пипетиране или разклащане на културната плоча? Ако това е последното и ако се разклати в кръг, е много вероятно клетките да бъдат хвърлени в периферната част поради центробежната сила, което води до по -малко клетки в средата. Повече от четири седмици!
Ето един добър начин: Преди да култивирате семенната плоча, поставете културната плоча в инкубатора за няколко часа насищане и след това я извадете. Силата трябва да бъде лека при засаждане на клетките. Добавянето бавно позволява на клетъчната суспензия да се влива в ямките на плочата, а култивираните клетки основно растат равномерно. Не забравяйте, че никога не се разклащате с шейкър или клетките ви ще се струпват заедно, както казахте.
Колкото по -малък е диаметърът на дупката на културната плоча, толкова по -очевидно е това явление. Това явление е неизбежно за 24 и 96-ямкови плочи, тъй като течността се придържа към стената, така че културният разтвор в кладенеца да не образува ниво на течност, но периферията е висока, точно като вдлъбнато огледало. Въпреки това, когато използвате тези два вида плаки за отвори, не е възможно да се добави достатъчно количество културен разтвор поради необходимостта от допълнителна интервенция, така че клетките да изглеждат „събиране на ръбове“ заедно с културния разтвор. Зависи какви индикатори трябва да наблюдавате. Ако е MTT, имунохистохимията ще повлияе на резултатите поради слоя на клетките.
Когато усвоявате клетките, обърнете внимание на пиперирането равномерно, за да избегнете клетъчните бучки и количеството културен разтвор в кладенеца трябва да е достатъчно. Като цяло добавете достатъчно културен разтвор, когато инокулирате и променете разтвора веднъж, когато добавите интервенция. Количеството културен разтвор, добавен към интервенционния разтвор, е равно на количеството културен разтвор към момента на инокулация, в този случай феноменът на "Edge Set" ще бъде подобрен, така че може да го опитате.

питам:
Това, което направих, беше експериментът за образуване на плака. Най -добре е да разпространите клетките в равномерен слой. Повечето от дупките са фини, когато вирусът е инокулиран, а някои от тях не са еднакви. Има големи разлики в клетъчната група. Бих искал да ви попитам какъв метод използвате, когато добавяте клетки?

отговор:
От решаващо значение е да пипетите клетките в едноклетъчна суспензия след храносмилането! Уверете се, че броят на клетките във всяка ямка е последователен при разделяне на плочата!
Разбира се, има и фактори за обработка. Паралелизмът между кладенците също е много важен. Например, когато добавяте медицина, смесете лекарството след разреждане, за да гарантирате, че концентрацията на всяка ямка е последователна!
Освен това, когато добавяте клетки и лекарства, тестовата група и контролната група трябва да се добавят от своя страна, за да се избегне разликата в клетъчната плътност и концентрацията на лекарството, причинена от последователността на добавяне на проби!

питам:
Издухването вече е равномерно, но дъската, 6 дупки и 24 дупки винаги са малко неравномерни и малко концентрирани в средата. Освен това е очевидно, че броенето се извършва и след ден или два плътността на всеки отвор е различна, което ще повлияе на откриването. Има ли добър начин?

отговор:
Ако използвате пипета Pasteur, не смучете прекалено много всеки път, защото клетките в пипетата автоматично ще потъват, често броят на клетките в първите няколко дупки е голям, а суспензията на клетката често е равномерна, а течността ще бъде Следвайте маршрута S-образна форма.
Ако използвате пипета, върховете трябва да бъдат обработени и отстранени, за да не повредят клетките, така че всеки път, когато се вземе течността, съответства на кладенец. По-точно е да добавите дупка едно към едно с върха. Но също така обърнете внимание на смесването на окачването.

За да настроите паралелна група, n трябва да е достатъчно голям (можете да я изчислите).

Не се разклащайте след покритие, тъй като разклащането ще накара клетките да се агрегират към центъра. Най -добре е да плачвате веднъж.

Порестата клетъчна култура Plate Yongyue Medical винаги е разглеждала контрола на качеството като живот на предприятието и е преследвал непрекъснатото подобряване на конкурентоспособността на предприятието. Компанията винаги се придържа към духа на предприятието да се подчинява на закони и разпоредби, като е строг със самодисциплина, да бъде снизходителна и дръзко да поеме отговорност като стандарт в експлоатация, поддържане и разширяване на пазара с отлично качество и отлично обслужване и изпълнение на The нужди на клиентите в най -голяма степен. . Win-Win с клиентите е нашата цел за развитие. Yongyue Medical! Вашият доверен партньор. Ние сме готови да сътрудничим искрено с вас, за да създадем по -добро бъдеще.